如何确定 HPLC 中的死体积？

对于HPLC来说，该如何计算死体积呢。

死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。

死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。

测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液（方法中会有规定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流动相得到的溶液，也有直接用100％色谱纯甲醇进样的情形）时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间（t0），这就是t0的实测结果。

然后通过计算得到系统死体积:

死体积（V₀) = 死时间t₀×流动相的流速F。