1、新柱柱效测试，为何塔板数明显偏低？
·确保系统状态正常，如有必要再冲洗一次。
·柱效受系统死体积扩散影响。沃特世(Waters®)色谱柱出厂测试是在体积zui小化的系统上进行，塔板数较高。通常自测如能达到70%以上，就可以接受。
·色谱柱体积越小，系统死体积(管路、检测器流通池)对柱效的影响就越大。对于小内径色谱柱(2.1和3 mmid)、和/或短的色谱柱(≤10cm)，尽可能减少系统死体积(管路长度/内径、流通池)，并仔细检查管路与色谱柱的连接。检测器采样频率应设置为20 Hz。
·用什么条件和什么样品测试的？峰保留时间越短，越容易受系统死体积影响。建议调整流动相条件，使峰保留时间在10分钟(常规HPLC系统)或5分钟(UHPLC系统)。
·样品进样体积越大，样品溶剂会导致峰扩散。HPLC柱可进样1 μL，UPLC柱可进样0.1 μL。
2、新柱上机，基线一直不能平衡，怎么办？
·首先断开检测器，按照对色谱柱的高洗脱强度溶剂5倍柱体积或者重复5次梯度冲洗色谱柱，然后按照测试柱效的方法测试。
·无规律的噪音，可考虑是否有气泡进入检测池，沃特世仪器用户请拨打免费售后，获得冲洗检测池指导。
·规律性的上下波动基线，可考虑是否泵混合效率不足，在泵后增加mixing loop，具体请咨询仪器维修工程师。
·实验室内的环境条件是否会干扰到仪器，以及色谱柱柱温情况。
·如果基线缓慢上飘或下飘，检查流动相是否存在配制不均匀、或者在缓慢挥发的情况。
·更换同类型的旧柱情况会如何？有时需要对新色谱柱进行一定的老化(可以运行几次梯度方法)。
3、新柱一进样峰就拖尾，是色谱柱已经坏了吗？
·检查系统状态正常，检查管路与色谱柱连接无死体积。
·对新色谱柱进行柱效测试，检查是柱效问题还是应用问题(可向我们索取柱效测试标准品或标准品配方)。
- 若柱效测试峰塔板数明显偏低，请参考问题1。
- 若柱效测试结果正常，判断为应用问题。
请考虑：这根色谱柱是否适合这个应用项目？过去那根旧色谱柱在进行这个项目测试时，色谱柱是否已经被离子对条件或其他改性条件用过？
4、新柱不能重现旧色谱柱谱图，是色谱柱的批次问题吗？
·新色谱柱是否需要老化或充分的活化平衡？旧色谱柱是否在测试项目以前经历过变性条件(如离子对试剂)？项目之前用过不同批次色谱柱测试并能重现吗？
·如手头有可用的旧柱，请对同一个样品、同一系统、同一配制流动相进行平行比对(同1天或隔天)，建议每根色谱柱上。重复3次平行进样。如果两根色谱柱上的各自3针进样谱图均稳定重现(可完全重叠，没有增减)，而两根色谱柱的谱图有所差异(个别峰的增加/丢失/分离改变)，可确认两柱有差异。可能该项目条件敏感，导致对色谱柱批次敏感(“挑批次”)。
·如有可能，优化分析方法，并用至少两根以上不同填料批次的色谱柱进行方法重现性检查。
5、新柱连续进样，保留时间不稳定，一直有漂移，怎么回事？
·色谱柱的平衡有没有充分，尤其是使用离子对试剂的情况下。
·流动相配制是否足够均匀，比如磷酸盐与乙腈需要剧烈震摇混合，超声混合不充分。
·流动相是否存在挥发性组分，导致缓慢变化。
·是否使用柱温箱，或者色谱柱是否暴露在温度变化较大的环境中(如空调风口等)。
·亲水作用色谱柱(如XBridge Amide柱，XBridge/Atlantis/CORTECS HILIC柱)，需要活化步骤，以及较长时间的再平衡，请询我们。
·进行柱效测试，连续进针，看保留时间是否漂移，确认仪器状态是不是稳定的
